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應(yīng)用案例
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產(chǎn)褐藻膠裂解酶菌株篩選與高產(chǎn)酶菌株的ARTP誘變選育

來源:   作者: 發(fā)布日期:2022-09-15 訪問量:4411

本期為您推薦河北農(nóng)業(yè)大學(xué)黃惠琴研究員研究團(tuán)隊(duì)發(fā)表在知名期刊《中國釀造》上的一篇文章:產(chǎn)褐藻膠裂解酶菌株篩選與高產(chǎn)酶菌株的ARTP誘變選育。

 

文章摘要內(nèi)容如下:

褐藻膠裂解酶是制備生物活性寡糖的重要工具酶,可通過β-消除反應(yīng)將褐藻酸鈉降解為在非還原端具有雙鍵的不飽和寡糖,在食品、農(nóng)業(yè)、工業(yè)等行業(yè)具有重要的應(yīng)用價(jià)值。由于現(xiàn)有微生物產(chǎn)酶量少、酶活低,限制了其進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用,尋找新的高效產(chǎn)酶菌、深入研究酶的產(chǎn)生條件、提高菌株發(fā)酵酶活力是迫切需要解決的問題。誘變是提高微生物發(fā)酵產(chǎn)酶水平的有效方法之一,已成為微生物誘變育種的重要技術(shù)。常壓室溫等離子體(ARTP)誘變是一種基于大氣環(huán)境溫度和射頻等離子體的新型微生物誘變育種技術(shù),可在大氣壓和室溫條件下高效誘導(dǎo)脫氧核糖核酸斷鏈,具有條件溫和、成本低、效率高的特點(diǎn),是微生物基因組的高效快速誘變育種技術(shù)。

本研究采用平板酶解圈法從南海海域海藻、動(dòng)物及沉積物樣品中篩選產(chǎn)褐藻膠裂解酶細(xì)菌,對篩選菌株進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定,并利用ARTP誘變技術(shù)選育高產(chǎn)褐藻膠裂解酶菌株。結(jié)果表明,共分離篩選得到酶活較高的細(xì)菌14株,16S rDNA比對分析結(jié)果表明,它們隸屬于3個(gè)門、5個(gè)綱、7個(gè)目、8個(gè)科、9個(gè)屬,其中有5株菌(占35.7%)可能代表著新的分類單元。以高產(chǎn)褐藻膠裂解酶海藻類芽孢桿菌(Paenibacillus algicola)HB172198T作為原始菌株,利用ARTP誘變技術(shù)選育獲得2株褐藻膠裂解酶活力明顯提高的突變株(編號(hào)分別為30-19、80-6),其酶活力分別比原始菌株提高了32.6%和21.6%,且連續(xù)6次傳代培養(yǎng)誘變菌株的產(chǎn)酶遺傳性狀穩(wěn)定。

 

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褐藻膠裂解酶是制備生物活性寡糖的重要工具酶,可通過β-消除反應(yīng)將褐藻酸鈉降解為在非還原端具有雙鍵的不飽和寡糖,在食品、農(nóng)業(yè)、工業(yè)等行業(yè)具有重要的應(yīng)用價(jià)值。由于現(xiàn)有微生物產(chǎn)酶量少、酶活低,限制了其進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用,尋找新的高效產(chǎn)酶菌、深入研究酶的產(chǎn)生條件、提高菌株發(fā)酵酶活力是迫切需要解決的問題。誘變是提高微生物發(fā)酵產(chǎn)酶水平的有效方法之一,已成為微生物誘變育種的重要技術(shù)。常壓室溫等離子體(ARTP)誘變是一種基于大氣環(huán)境溫度和射頻等離子體的新型微生物誘變育種技術(shù),可在大氣壓和室溫條件下高效誘導(dǎo)脫氧核糖核酸斷鏈,具有條件溫和、成本低、效率高的特點(diǎn),是微生物基因組的高效快速誘變育種技術(shù)。

本研究采用平板酶解圈法從南海海域海藻、動(dòng)物及沉積物樣品中篩選產(chǎn)褐藻膠裂解酶細(xì)菌,對篩選菌株進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定,并利用ARTP誘變技術(shù)選育高產(chǎn)褐藻膠裂解酶菌株。結(jié)果表明,共分離篩選得到酶活較高的細(xì)菌14株,16S rDNA比對分析結(jié)果表明,它們隸屬于3個(gè)門、5個(gè)綱、7個(gè)目、8個(gè)科、9個(gè)屬,其中有5株菌(占35.7%)可能代表著新的分類單元。以高產(chǎn)褐藻膠裂解酶海藻類芽孢桿菌(Paenibacillus algicola)HB172198T作為原始菌株,利用ARTP誘變技術(shù)選育獲得2株褐藻膠裂解酶活力明顯提高的突變株(編號(hào)分別為30-19、80-6),其酶活力分別比原始菌株提高了32.6%和21.6%,且連續(xù)6次傳代培養(yǎng)誘變菌株的產(chǎn)酶遺傳性狀穩(wěn)定。

 

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