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應(yīng)用案例
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抗噬菌體L-蘇氨酸工程菌的選育及機理分析

來源:   作者: 發(fā)布日期:2022-06-15 訪問量:3224

本期為您推薦寧夏醫(yī)科大學(xué)王強老師研究團(tuán)隊發(fā)表在知名期刊《飼料研究》上的一篇文章:抗噬菌體L-蘇氨酸工程菌的選育及機理分析。

 

文章摘要內(nèi)容如下:

噬菌體是侵染細(xì)菌和放線菌的病毒,具有超顯微、無細(xì)胞結(jié)構(gòu)、專性活細(xì)胞寄生等特征。噬菌體污染現(xiàn)象普遍在氨基酸發(fā)酵工業(yè)存在,會造成發(fā)酵周期延長、發(fā)酵產(chǎn)量降低、倒罐、經(jīng)濟(jì)損失、浪費時間等問題。大腸桿菌YPT在發(fā)酵生產(chǎn)蘇氨酸過程中,有時會感染噬菌體,導(dǎo)致蘇氨酸產(chǎn)酸指標(biāo)嚴(yán)重降低,增加蘇氨酸生產(chǎn)成本。因此,以YPT為出發(fā)菌,擬采用誘變篩選到1株抗噬菌體的突變株。常壓室溫等離子體(ARTP)是一種能夠在大氣壓下產(chǎn)生溫度在25~40 ℃、具有高活性粒子濃度的等離子體流,其富含的活性能量粒子對細(xì)菌的遺傳物質(zhì)造成損傷,誘發(fā)生物細(xì)胞啟動SOS修復(fù)機制。SOS修復(fù)是一種高容錯率修復(fù)過程,修復(fù)過程中會產(chǎn)生種類豐富的錯配位點,最終穩(wěn)定遺傳進(jìn)而形成突變株。

本研究通過常壓室溫等離子體誘變蘇氨酸生產(chǎn)菌,篩選獲得具有噬菌體抗性的蘇氨酸基因工程菌株。從蘇氨酸發(fā)酵染噬菌體發(fā)酵液中分離得到混合噬菌體(P-1)。以P-1為篩選因子,通過常壓室溫等離子體誘變蘇氨酸生產(chǎn)菌YPT、抗性初篩、溶原性驗證、噬菌體抗性遺傳穩(wěn)定性驗證、發(fā)酵罐產(chǎn)酸等驗證。結(jié)果顯示:通過篩選得到1株對P-1具有穩(wěn)定抗性的蘇氨酸生產(chǎn)菌株,命名為YPT-1。在分子水平上對突變株YPT-1抗噬菌體的機制做初步研究。采用CRISPR技術(shù)進(jìn)行敲除驗證,證實fhuA基因的缺失可致使菌株獲得噬菌體抗性。研究表明,經(jīng)過初步產(chǎn)酸驗證,此菌株產(chǎn)酸指標(biāo)與對照株(誘變出發(fā)菌YPT)相比未下降,且產(chǎn)酸穩(wěn)定,具有較好的工業(yè)化應(yīng)用價值。

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本期為您推薦寧夏醫(yī)科大學(xué)王強老師研究團(tuán)隊發(fā)表在知名期刊《飼料研究》上的一篇文章:抗噬菌體L-蘇氨酸工程菌的選育及機理分析。

 

文章摘要內(nèi)容如下:

噬菌體是侵染細(xì)菌和放線菌的病毒,具有超顯微、無細(xì)胞結(jié)構(gòu)、專性活細(xì)胞寄生等特征。噬菌體污染現(xiàn)象普遍在氨基酸發(fā)酵工業(yè)存在,會造成發(fā)酵周期延長、發(fā)酵產(chǎn)量降低、倒罐、經(jīng)濟(jì)損失、浪費時間等問題。大腸桿菌YPT在發(fā)酵生產(chǎn)蘇氨酸過程中,有時會感染噬菌體,導(dǎo)致蘇氨酸產(chǎn)酸指標(biāo)嚴(yán)重降低,增加蘇氨酸生產(chǎn)成本。因此,以YPT為出發(fā)菌,擬采用誘變篩選到1株抗噬菌體的突變株。常壓室溫等離子體(ARTP)是一種能夠在大氣壓下產(chǎn)生溫度在25~40 ℃、具有高活性粒子濃度的等離子體流,其富含的活性能量粒子對細(xì)菌的遺傳物質(zhì)造成損傷,誘發(fā)生物細(xì)胞啟動SOS修復(fù)機制。SOS修復(fù)是一種高容錯率修復(fù)過程,修復(fù)過程中會產(chǎn)生種類豐富的錯配位點,最終穩(wěn)定遺傳進(jìn)而形成突變株。

本研究通過常壓室溫等離子體誘變蘇氨酸生產(chǎn)菌,篩選獲得具有噬菌體抗性的蘇氨酸基因工程菌株。從蘇氨酸發(fā)酵染噬菌體發(fā)酵液中分離得到混合噬菌體(P-1)。以P-1為篩選因子,通過常壓室溫等離子體誘變蘇氨酸生產(chǎn)菌YPT、抗性初篩、溶原性驗證、噬菌體抗性遺傳穩(wěn)定性驗證、發(fā)酵罐產(chǎn)酸等驗證。結(jié)果顯示:通過篩選得到1株對P-1具有穩(wěn)定抗性的蘇氨酸生產(chǎn)菌株,命名為YPT-1。在分子水平上對突變株YPT-1抗噬菌體的機制做初步研究。采用CRISPR技術(shù)進(jìn)行敲除驗證,證實fhuA基因的缺失可致使菌株獲得噬菌體抗性。研究表明,經(jīng)過初步產(chǎn)酸驗證,此菌株產(chǎn)酸指標(biāo)與對照株(誘變出發(fā)菌YPT)相比未下降,且產(chǎn)酸穩(wěn)定,具有較好的工業(yè)化應(yīng)用價值。

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